明膠酶譜法分析試劑盒配置溶液時需要注意哪些問題！

基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌，活化后能夠降解細胞外基質的膠原蛋白，又稱膠原酶。通過影響細胞外基質，膠原酶參與胚胎發育、形態發生、組織重塑等過程，并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經等許多疾病過程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過程，其在診斷和治療中的意義日益受到重視。

酶譜法的基本過程是先將樣品進行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1%明膠）電泳分離，然后在有二價金屬離子存在的緩沖系統中使樣品中的MMP-2和MMP-9恢復活性，在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠，后用考馬斯亮藍將凝膠染色，再脫色，在藍色背景下可出現白色條帶，條帶的強弱與MMP-2和MMP-9活性成正比。

明膠酶譜法分析試劑盒配置溶液時需要注意哪些問題！

溶液配制方法：

1. 染色液配方：0.25g 考馬斯亮藍R250+420ml 甲醇+100ml 冰乙酸，定容至1000ml，混合1h 后用
Whatman 1 號濾紙過濾，于室溫可無限期保存；

2. 脫色液配方：冰醋酸:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V）；

3. 保存液：7％冰醋酸；

4. 凝膠染色之后，染色液可以回收利用，裝入新容器內，室溫或4 ºC 保存，可反復使用2-4 次。

相關文獻支持：

1. Nagase H and Woessner JF. Matrix Metalloproteinases. J Biol Chem, 1999, 274, 21491-21494

2. Heussen C, and Dowdle EB. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamidegels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. Anal. Biochem，1980,102,196–202

3.綠茶多酚EGCG增強動脈粥樣硬化斑塊穩定性及其相關機制研究

明膠酶譜法分析試劑盒配置溶液時需要注意哪些問題！